— 胎牛血清有必要熱滅活嗎 —

01

目的

血清的滅活就是將血清置于56℃作用30min，然后將它們分裝儲存于-20℃。熱滅活的目的是為了去除血清中的補體等對熱敏感的物質(zhì)，以排除對免疫分析的影響。胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。研究人員曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進行測定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50%，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補體固定實驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。此外，多數(shù)實驗室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進行預(yù)熱的過程，也對熱敏的補體有滅活的作用。因此，胎牛血清在大部分的細胞培養(yǎng)中是不需要滅活的，但在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

02

負面影響

雖然熱滅活可以去除血清中的一些物質(zhì)，減少免疫球蛋白的細胞毒性而不破壞多肽生長因子，但同時也會對一些血清中較不穩(wěn)定的成分進行破壞，如生長因子和氨基酸。熱滅活通常會降低血清支持細胞生長的能力，并且對血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生（這些沉淀主要是析出的纖維蛋白以及脂蛋白），而導(dǎo)致的沉淀又常常被認為是微生物的污染。注意到這個現(xiàn)象后，為了驗證污染的存在或促進沉淀的溶解，許多培養(yǎng)者往往將血清放置37℃溫育，這將會導(dǎo)致情況變得更糟，因為血清中的蛋白質(zhì)會進一步的析出，再次破壞血清的營養(yǎng)成分。而為了確定血清未被污染所進行的鏡檢，無菌培養(yǎng)實驗以及革蘭氏染色實驗更是浪費了實驗者大量的時間以及精力，給用戶以及供應(yīng)商帶來不必要的麻煩。

— 結(jié)論 —

綜上所述，除了在免疫學(xué)研究中為排除補體的干擾需要對血清進行滅活外，多數(shù)細胞培養(yǎng)時血清的熱滅活并不是必要的。我們建議，對于那些對血清進行滅活的用戶，需要通過對比試驗來證實其必要性，并確定滅活的適當(dāng)條件；此外，在滅活過程中，需要嚴格認真監(jiān)測，并選擇一個可重復(fù)的方案進行操作。